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端粒长度检测试剂盒

本产品试剂盒采用双色荧光 qPCR(SYRBgreen+VIC)检测端粒相对长度,检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。
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【产品规格】

1. TL25  25 /

2. TL50  50 /

【产品说明】

 

端粒(Telomeres):是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列,端粒长度的变化,与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术,用时短,操作简单,结果准确,适用于批量样本检测。

本产品试剂盒采用双色荧光 qPCRSYRBgreen+VIC检测端粒相对长度,检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。该试剂盒具有以下特点。

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1. 稳定:全程闭管操作,无交叉污染。

2. 可靠端粒与内参单管检测,减少孔间干扰。

    内参基因为多拷贝,与端粒量差降低。

3. 方便:操作简单,无需电泳步骤。

4. 定量 △CT 值,可定量检测端粒相对长度。

【运输及保存条件】

低温冷冻运输, -20℃保存,有效期 1 年,冻融以后,4℃保存,有效期4周。

 

【产品组分】

 

组分名称

TL25

TL50

Biowing®Telomere Detection Mix

260µL

520µL

Primer

140µL

280µL

Standard

50µL

50µL

RNase Free Water

50µL

50µL

注:本试剂盒提供试剂,使用前请上下轻柔颠倒十次混匀,后低速离心、小心开启。避免起泡。

 

【操作步骤】

 

1. 品质控

使用商业化DNA抽提试剂盒提取血液细胞或组织DNADNA纯度A260/A280≈1.8,检测样品浓度标化为15~20ng/µL,上样4µL。

:标准品浓度标化为15~20ng/µL,上样4µL。样品及标准品浓度过高或过低会影响扩增效率,对实验造成干扰,测量结果误差较大。

 

2. qPCR反应体系及条件

反应体系以20µL为例

 

组分/样品管

待测样品管(µL)

阴性对照管(µL)

标准品对照(µL)

Biowing®Telomere Detection Mix

10.4

10.4

10.4

Primer

5.6

5.6

5.6

RNase Free Water

0

4

0

Standard

0

0

4

Sample

4

0

0

 

PCR仪设置以 ABI 7500为例,其他型号定量PCR仪应通过标准品进行参数校正或咨询专业技术人员。

步骤

循环数

温度

时间

1

预变性

1

95

2 min

 

2

变性

 

40

95

15 s

退火

50

1 min

延伸

72

45 s

温度选择:50退火时收集荧光信号

通道选择:样本检测通道-SYBRgreen;内参检测通道-VIC

 

【基线设置】

内参基线设定:以标准品基线设定内参基线,将内参的基线设定为6~15个循环。

端粒基线设定:以标准品基线设定端粒基线,将端粒的基线设定为3~15个循环。

【阈值设置】

内参阈值设定:以标准品CT值设定内参扩增曲线阈值,将内参 CT 值定为 21±1

端粒阈值设定:以标准品CT值设定端粒扩增曲线阈值,将端粒 CT 值定为13±1

说明:

1如果标准品的内参CT >25,但阴性对照管的内参CT 值正常, 表明试剂盒扩增效率下降或仪器运行障碍。

2如果阴性对照管的内参或端粒CT25,表明在环境或加样过程中存在轻微污染。

备注

1. 样本检测以及标准品的使用应做技术上三重复,阴性对照做单重复。

2. 如果检测样本为血液DNA,可以将所得端粒相对长度在上海翼和应用生物技术有限公司构建的1500例中国人群数据库比对,评估样本个体端粒的相对长度;若选用其他样本,建议自行构建数据库并做进一步分析。 

3. 端粒长度计算方法(T/S):先分别计算标准品与样品的△CT=CT(端粒)-CT(内参)

                            再计算 T/S=log2 (CT(样品)-CT(标准品))

T为待测样品,S为标准品,T/S为待测样品与标准品端粒相对长度

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