当前位置:首页 > 产品中心 > 试剂盒

支原体检测试剂盒

支原体(mycoplasma):目前发现的极小的原核生物,据统计约15-35%的细胞被支原体污染。支原体污染会改变宿主细胞的结构与功能,易致实验结果不稳定,须对培养细胞定期进行支原体检测。
  • snp分型
  • 询价

  【产品规格】

  1.BPM25 25次/盒

  2.BPM50 50次/盒

  【产品说明】

  支原体(mycoplasma):目前发现的极小的原核生物,据统计约15-35%的细胞被支原体污染。支原体污染会改变宿主细胞的结构与功能,易致实验结果不稳定,须对培养细胞定期进行支原体检测。

  本产品试剂盒采用双色荧光qPCR(TaqMan探针法)检测支原体DNA,检测对象为细胞培养的上清液或细胞本身。该试剂盒具有以下特点:

  1.灵敏:100拷贝的支原体可被检出。

  2.稳定:全程闭管操作,无交叉污染。

  3.可靠:含内参基因,避免假阴性。

  4.方便:操作简单,无需电泳步骤。

  5.定量:以CT值判断,可定量检测。

  【运输及保存条件】

  低温冷冻运输, -20℃保存,有效期1年。

  【产品组分】

组分名称

BPM25

BPM50

Biowing®Probe qPCR SuperMix

450µL

900µL 

Positive Control

50µL

100µL

RNase Free Water

50µL

100µL

  注:本试剂盒提供试剂,使用前先低速离心、后小心开启。使用时请上下轻柔颠倒十次混匀,避免起泡,并低速短暂离心后使用。

  【操作步骤】

 1. 样品制备(自备)

  样品为培养上清

  (1) 取 1~1.5mL 细胞培养上清;

  (2) 1000 rpm 离心3 分钟;

  (3) 取 2µL上清作为模板进行qPCR 反应(标记为sample)。

 2. qPCR反应体系及条件

  反应体系以20µL为例

组分/样品管

待测样品管(µL)

阳性对照管(µL)

阴性对照管(µL)

Biowing®Probe qPCR SuperMix

18

18

18

RNase Free Water

0

0

2

Sample

2

0

0

Positive Control

0

2

0

  PCR仪设置以 ABI 7500为例,相对定量模式,选择TaqMan探针法。

步骤

循环数

温度

时间

1

预变性

1

94℃

5 min

2

变性

40

95℃

15 s

退火

58℃

1 min

延伸

72℃

30 s

温度选择:72℃延伸时收集荧光信号

通道选择:样本检测通道-FAM;内参检测通道-HEX,无HEX通道,可使用VIC通道。

  【阈值设置】以ABI 7500为例

  内参(HEX/VIC)阈值设定:以阴性对照定内参扩增曲线阈值,将内参的CT值定为27±2 ;

  支原体(FAM)阈值设定:以阳性对照定支原体扩增曲线阈值,将支原体(FAM)的CT值定为26±3 。

  说明:

  (1)如果阳性对照管的支原体(FAM)CT值>30,但阳性对照管及阴性对照管的内参(HEX)CT值正常,表明阳性支原体对照模板有降解。

  (2)如果阴性对照管的内参(HEX/VIC)CT值>30,阳性对照管的内参(HEX)CT值>30且支原体(FAM)CT值>30,表明Biowing®Probe qPCR SuperMix试剂成分已失效。

  【结果判读

  根据支原体(FAM)CT值判定是否发生支原体污染,具体标准如下:

PCR模板

支原体(FAM)CT值

判定说明

阳性对照

26±3

阳性成立

>30

阳性不成立

阴性对照

>34

阴性成立

<34

阴性不成立

待测样品

(内参CT值<30)

>34

阴性

30-33

灰区,需验证

25-29

弱阳性

19-24

阳性

<19

强阳性

  注:样本为细胞抽提DNA时,由于存在细胞基因组DNA,内参CT可能会偏小,但不影响结果判定。

  【标准曲线】

  备注:CT值102拷贝≈30,CT值30以上,qPCR定量较不稳定,若支原体检测CT值约30-33之间,可重检一次。

  【附录1可检测支原体物种名录】

序号

物种名称

序号

物种名称

1

Mycoplasma cloacale

35

Mycoplasma verecundum

2

Mycoplasma cricetuli

36

Spiroplasma citri

3

Mycoplasma flocculare

37

Spiroplasma kunkelii

4

Mycoplasma pulmonis

38

Spiroplasma mirum

5

Spiroplasma eriocheiris

39

Spiroplasma poulsonii

6

Mycoplasma agassizii

40

Mycoplasma collis

7

Mycoplasma alkalescens

41

Spiroplasma litorale

8

Mycoplasma alligatoris

42

Spiroplasma turonicum

9

Mycoplasma anatis

43

Spiroplasma sabaudiense

10

Mycoplasma anseris

44

Spiroplasma culicicola

11

Mycoplasma arginini

45

Entomoplasma lucivorax

12

Mycoplasma arthritidis

46

Mesoplasma chauliocola

13

Mycoplasma auris

47

Mesoplasma syrphidae

14

Mycoplasma bovoculi

48

Acholeplasma multilocale

15

Mycoplasma canadense

49

Entomoplasma luminosum

16

Mycoplasma canis

50

Entomoplasma somnilux

17

Mycoplasma conjunctivae

51

Spiroplasma diminutum

18

Mycoplasma crocodyli

52

Spiroplasma apis

19

Mycoplasma cynos

53

Spiroplasma helicoides

20

Mycoplasma dispar

54

Spiroplasma taiwanense

21

Mycoplasma elephantis

55

Spiroplasma syrphidicola

22

Mycoplasma hominis

56

Spiroplasma chrysopicola

23

Mycoplasma hyopneumoniae J

57

Mycoplasma feriruminatoris

24

Mycoplasma hyorhinis

58

Mycoplasma putrefaciens

25

Mycoplasma hyosynoviae

59

Mycoplasma mycoides

26

Mycoplasma leonicaptivi

60

Spiroplasma cantharicola

27

Mycoplasma mobile

61

Mycoplasma capricolum

28

Mycoplasma molare

62

Mesoplasma florum

29

Mycoplasma orale

63

Mycoplasma yeatsii

30

Mycoplasma ovipneumoniae

64

Mesoplasma photuris

31

Mycoplasma pullorum

65

Mycoplasma collis

32

Mycoplasma salivarium

66

Mycoplasma fermentans

33

Mycoplasma sturni

67

Acholeplasma laidlawii

34

Mycoplasma synoviae

68

Mycoplasma pirum


 【附录2 适用荧光定量PCR仪品牌型号】

序号

生产商

机器型号

1

ABI

7500

2

ABI

7500 Fast DX

3

ABI

StepOnePlus

4

ABI

QuantStudio5

5

ABI

StepOne

6

ABI

QuantStudio7

7

ABI

VIVA7

8

ABI

QuantStudio 3

9

Roche

Roche LightCycler96

10

Roche

Roche LightCycler480

11

Biorad

Bio-Rad CFX96

12

宏石

SLAN-96S/48P

13

  注:适用荧光定量PCR仪为迄今为止我们客户配备的定量仪器品牌型号,如您的荧光定量PCR仪不在我们的范围,也欢迎联系我们,申请试用。       支原体检测试剂盒

<>
  • 支原体检测试剂盒
隐私协议
×

平台信息提交-隐私协议

● 隐私权政策

我们致力于保护您在使用本网站时所提供的隐私、私人资料以及个人的资料(统称“个人资料”)。使我们在收集、使用、储存和传送个人资料方面符合(与个人资料隐私有关的法律法规)及消费者保护方面的最高标准。为确保您对本网站在处理个人资料上有充分信心,您切要详细阅读及理解隐私政策的条文。 本网站(下称“我们”)尊重并保护用户隐私, 特别时您一旦使用本网站,将被视为接受、同意、承诺和确认本隐私协议;您在自愿下连同所需的同意向我们披露个人资料;您会遵守本隐私政策的任何修改;您同意我们的相关业务人员就您可能会感兴趣的产品和服务与您联络(除非您已经表示不想收到该等讯息)。被收集的个人资料的种类经您的同意、我们会收集、管理和监控个人资料。

1、 适用范围

为用户提供更好、更优、更个性化的服务是本网站坚持不懈的追求,也希望通过我们提供的服务可以更方便您的需求。本隐私权政策适用于本网站提供的所有关于信息收集的服务,您访问本网站及使用本网站提供的服务均使用本隐私权政策。

2、 我们收集哪些信息

为了向您提供我们的各项服务,您需要提供个人资料信息,其中包括个人资料和不具名的资料,包括但不限于:个人资料(您的姓名、性别、年龄、出生日期、电话号码、传真号码、住址或通讯地址、电子邮箱地址等)。

3、 我们如何使用收集到的信息

收集个人资料和不具名的资料目的及用途如下:通过本网站向您提供我们的各项服务;当您使用我们的网站时,能辨认以及确认您的身份;让您使用本网站时得到为您而设的服务;本网站的相关业务人员有需要时可以与您联系;让您在使用本网站时更加方便;您提供给我们的个人资料及不具名资料,只保留到搜集的目的已达到的时候,除非因适用的法律法规之规定而继续保留。个人资料的拥有权及披露在我们网站上所收集的一切资料都由我们所拥有,不会出租或出售给任何无关的第三方。

4、 我们如何保护信息

对于个人资料的保护,我们实施妥适的实物、电子、管理的措施来保护和保障您的个人资料的安全。我们尽力确保通过本网站所收集的任何个人资料皆免于任何与我们无关的第三者的滋扰。我们采取的安全措施不限于: 实物措施:存有您个人资料的记录会被存放在有锁的地方 电子措施:存有您个人资料的电脑数据会被存放在受严格登录限制的电脑系统和存储媒体上 管理措施:只有经过我们授权的职员才能接触到您的个人资料,这些职员需要遵守我们个人资料保密的内部规则 若您知悉本网站上有任何安全方面的漏洞,请及时联络我们,使我们可以尽快采取妥适的行动;尽管实施了上述安全措施,我们不能保证资料在互联网上的输送绝对安全,因此我们不能绝对保证您通过本网站提供给我们的个人资料及不具名的资料在一切时候都是安全的。对任何因未经授权而接触您个人资料所发生的事件我们一概不承担责任,于这方面产生或导致的任何损失和损害,我们也不负责赔偿。

5、 未成年人保护法

未成年人在无任何家长或监护人相信有未成年人在未经家长或监护人批准或同意下向本网站提供了个人资料,请及时联系本网站所公示电话及客服电话等,以确保资料被除去。

6、 隐私政策的修定与生效

随着本网站的服务范围扩大,我们可能适时修订《法律声明及隐私权政策》,该等修订构成本《法律声明及隐私权政策》的一部分。为避免您不能及时获知该等修订,请您经常阅读本《法律声明及隐私权政策》。无论何种方式,如您继续使用我们的服务,即表示同意受经修订的本《法律声明及隐私权政策》的约束。