描述

支原体快检试剂盒（探针法-科研版）

【产品货号及规格】

BPM 20-01 20 T/盒

【产品说明】

支原体(Mycoplasma)：目前发现的最小的原核生物，据统计

约 15~35% 的细胞被支原体污染。支原体污染会改变宿主细胞的

结构与功能，易致实验结果不稳定，须对培养细胞定期进行支原

体检测。

本产品试剂盒采用多套引物探针在 FAM 通道检测支原体

DNA，采用一套引物探针在 VIC 通道检测内参 DNA，检测对象

为细胞培养的上清液或细胞本身。该试剂盒具有以下特点：

稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

可靠：含内参基因，避免假阴性。

方便：操作简单，无需电泳步骤。

定量：以 Ct 值判断，可定量检测。

【运输及保存条件】

低温冷冻运输，-20 ℃保存，有效期 1 年。

【产品组分】

组分名称 装量 储存条件

Biowing

®MyqPCR

Reaction Mix1

200 μL×1 管 -20 ℃

Biowing

®MyPrimer&

Probe Mix2 冻干粉×1 管 -20 ℃，避光

Mycoplasma Positive Control 50 μL×1 管 -20 ℃

RNase Free Water 1 mL×1 管 -20 ℃

石蜡油 1 mL×1 管 -20 ℃

注：本试剂盒提供试剂，使用前先低速离心后小心开启。使

用时请上下轻柔颠倒十次混匀，避免起泡，并低速短暂离心后使

用。

【操作步骤】

1.试剂的复溶

Biowing

®MyPrimer&Probe Mix2 先12,000 rpm离心5 min，再

用179 μL/管RNase Free Water复溶，混匀1 min，瞬离，并常温放

置5-10 min后备用。

2.样本制备（自备）

样本可直扩，具体操作方法见附录2。

3.qPCR 反应体系及条件反应体系以20 µL为例：

1. 震荡混匀 qPCR Mix，低速离心，将管盖残留液体收集至管

底。

2. 向每孔反应管中分装 18 μL qPCR Mix。

3. 向已分装过 qPCR Mix 的反应管中加入15 μL石蜡油。

4. 向反应管中穿过石蜡油层加样，3000 rpm 瞬离5 s，加样示

例如下：

PCR 仪设置

以ABI 7500为例，选择TaqMan 探针法：

步骤 循环数 温度 时间

1 预变性 1 95 ℃ 30 s 2 变性

35

95 ℃ 15 s 退火 58 ℃ 1 min 延伸 72 ℃ 30 s 58 ℃延伸时收集荧光信号

通道选择：样本检测通道-FAM；内参检测通道-VIC 注：建议其他不同类型样本，先做适应性验证，因为不同样本杂

质性质不同。 【阈值设置】

以ABI 7500为例，扩增曲线选择 log 法，基线设置 3~15 个循环。

1.内参(VIC)阈值设定：以阴性对照定内参扩增曲线阈值，将内参

的 Ct 值定为 30±3。

2.支原体(FAM)阈值设定：以阳性对照定支原体扩增曲线阈值，

将支原体(FAM)的 Ct 值定为 26±3。 【结果判读】

根据支原体(FAM) Ct 值判定是否发生支原体污染，具体标准如下：

PCR 模板 支原体(FAM) Ct 值 判定说明

阳性对照

26±3 阳性成立

＞29 阳性不成立

阴性对照

≥33 阴性成立

＜33 阴性不成立

待测样品

（内参 Ct 值≤32）

≥33 阴性

＜33 阳性

注：检测结果与其他方法检测结果矛盾时：

1.检查内参通道扩增是否正常，扩增曲线是否选择 log 法。

2.内参扩增不正常，表明 PCR 反应未正常进行，PCR 体系受到干

扰，需重复检测。

3.内参扩增正常，结合 Ct 值和扩增曲线形态判断。

4.无典型扩增曲线，可认为该样本为支原体阴性。有典型扩增曲

线，需重复检测。重复结果不一致判为阴性；结果一致，判为阳

性。 【注意事项】

由于 PCR 反应非常灵敏，实验操作中应注意以下事项，以免发生

DNA 污染：

1.建议阳性对照与待测样本、阴性对照在实验室的不同区域进行添

加，在 qPCR 反应板上阳性对照的排布应远离待测样本和阴性对照。

2.建议使用不同的移液器添加阳性对照与待测样本、阴性对照，并

使用带滤芯的枪头进行加样。

3.试剂盒开启后，阳性对照应与试剂 Mix、阴性对照分开存放。

4. qPCR 封膜时须反复压紧。

5.实验室环境须定期清除支原体。

组分/样品管

待测样品管

(µL)

阳性对照管

(µL)

阴性对照管

(µL) Biowing®MyqPCR

Reaction Mix1

10 10 10 Biowing®MyPrimer&

Probe Mix2

8 8 8 RNase Free Water 0 0 2 Sample 2 0 0 Mycoplasma Positive Control 0 2 0